Info
- Publication number
- RU2198407C2
RU2198407C2
RU2001104761A
RU2001104761A
RU2198407C2
RU 2198407 C2
RU2198407 C2
RU 2198407C2
RU 2001104761 A
RU2001104761 A
RU 2001104761A
RU 2001104761 A
RU2001104761 A
RU 2001104761A
RU 2198407 C2
RU2198407 C2
RU 2198407C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
dilution
reaction
diluting liquid
latex agglutination
tween
Prior art date
2001-02-20
Application number
RU2001104761A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2001104761A
(ru
Inventor
А.А. Зайцев
В.В. Бинатова
Original Assignee
Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
2001-02-20
Filing date
2001-02-20
Publication date
2003-02-10
2001-02-20Application filed by Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
filed
Critical
Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
2001-02-20Priority to RU2001104761A
priority
Critical
patent/RU2198407C2/ru
2003-02-10Application granted
granted
Critical
2003-02-10Publication of RU2198407C2
publication
Critical
patent/RU2198407C2/ru
2003-02-20Publication of RU2001104761A
publication
Critical
patent/RU2001104761A/ru
Реакция торможения латексной агглютинации
Реакция торможения латексной агглютинации — это метод, используемый для определения наличия или отсутствия определенного наркотика в образце мочи. Он включает конкуренцию между конъюгатом латекс-лекарство и любым лекарством, которое может присутствовать в образце, за связывание с антителом. Тест выполняется с использованием следующей процедуры:
- Готовят лунку для смешивания на предметном стекле, и в эту лунку помещают реагент антитела, буфер и латексный реагент.
- Образец мочи добавляют в лунку для смешивания, содержащую смесь реагента антител, буфера и латексного реагента.
- Если интересующий наркотик отсутствует в образце мочи, конъюгат латекс-лекарство связывается с антителом, что приводит к образованию крупных частиц, которые агглютинируют. Следовательно, наличие агглютинации свидетельствует об отсутствии препарата в образце мочи.
- Однако, если лекарство присутствует в образце мочи, оно конкурирует с латексным конъюгатом за ограниченное количество доступных антител. Если присутствует достаточное количество препарата, это предотвратит образование частиц и последующую агглютинацию. В таких случаях положительный образец мочи не изменит внешний вид тестируемой смеси.
Реакция торможения латексной агглютинации обычно используется в качестве инструмента скрининга для определения отсутствия или присутствия определенных наркотиков в образцах мочи. Отсутствие агглютинации указывает на отсутствие наркотиков, а наличие агглютинации предполагает присутствие рассматриваемого препарата. Этот тест представляет собой быстрый и удобный метод для целей скрининга на наркотики.
Реферат патента 2010 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛЬНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ЛАТЕКСНОЙ АГГЛЮТИНАЦИИ
Изобретение относится к области биомедицинских технологий, в частности к способу получения антительной тест-системы на основе полимерных микросфер — носителей биолигандов (протеин А, специфический иммуноглобулин G) для выявления антигенов: Yersinia enterocolitica серотип O3, Leptospira canicola, Salmonella pulorum, вируса инфекционного бронхита кур (ИБК) штамм H1 20. Способ получения антительной тест-системы заключается в том, что смешивают в равных объемах физиологический раствор, содержащий протеина А (штамма Staphylococcus aureus), и полимерные микросферы 0,5%-ной полимерной суспензии. Смесь помещают в термостат при +36-38°С, отмывают полимерную суспензию, осадок смешивают с физиологическим раствором, содержащим специфические IgG к одному из антигенов. Полученную смесь выдерживают в термостате при +36-38°С, отмывают полимерную суспензию, осадок смешивают физиологическим раствором, содержащим альбумин. Использование способа позволяет получить тест-системы с высокой чувствительностью реакции латексной агглютинации при выявлении антигенов Yersinia enterocolitica, Leptospira canicola, Salmonella pulorum, вируса ИБК.
Справка
- Смитс Х.Л., ван дер Хоорн М.А., Горис М.Г., Гуссенховен Г.К., Йерсин С., Сасаки Д.М., Терпстра В.Дж., Хартскерл Р.А. Простой анализ латексной агглютинации для экспресс-диагностики лептоспироза человека. Дж. Клин Микробиол. 2000 март; 38(3):1272-5. doi: 10.1128/JCM.38.3.1272-1275.2000. PMID: 10699040; PMCID: PMC88605.
- https://www.clinisciences.com/en/read/serological-tests-in-mycology-1190/latex-agglutination-assays-2091.html
- https://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=69&sim=195&cnt=1
- https://miravistalabs.com/medical-fungal-infection-testing/antigen-detection/cryptococcus-latex-agglutination-test/
- https://www.lornelabs.com/news-events/blog/everything-you-should-know-about-latex-agglutination-tests
- https://www.ucsfhealth.org/medical-tests/003334
- https://microbeonline.com/immunology-note/
- https://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=69&sim=195&cnt=2
- https://www.ucsfbenioffchildrens.org/tests/003334.html
- https://www.lornelabs.com/news-events/blog/everything-you-should-know-about-latex-agglutination-tests
- https://medlineplus.gov/ency/article/003334.htm
- https://microbenotes.com/latex-agglutination-test/#applications-of-latex-agglutination-test
Ограничения теста латексной агглютинации
Хотя тест латексной агглютинации имеет ряд преимуществ, важно учитывать его ограничения. Вот основные ограничения теста латексной агглютинации:
Требования стандартизации: Условия, при которых проводятся процедуры латексной агглютинации, такие как рН, осмолярность и концентрация ионов, должны быть тщательно стандартизированы. Изменения этих условий могут влиять на степень связывания, которое происходит между латексными шариками и целевым антигеном или антителом
Поэтому для обеспечения точных и надежных результатов необходимо уделять пристальное внимание стандартизации.
Ложноположительный: некоторые компоненты, присутствующие в жидкостях организма, такие как ревматоидный фактор, могут приводить к ложноположительным реакциям в системах латекс-агглютинации
Эти ложноположительные результаты могут помешать интерпретации результатов теста, что может привести к неправильной диагностике или ненужному лечению
Крайне важно знать о потенциальных мешающих факторах и при необходимости проводить подтверждающие тесты.
Требования к предварительной обработке: Некоторые методы агглютинации требуют предварительной обработки образцов перед тестированием. Например, может потребоваться нагрев образцов до 56°C или обработка этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА)
Эти этапы предварительной обработки могут занимать много времени и усложнять процесс тестирования. Им также может потребоваться дополнительное оборудование или реагенты, что увеличивает общую стоимость и усилия.
Ограниченная специфичность: хотя тесты на латекс-агглютинацию обычно специфичны для целевого антигена или антитела, их специфичность может быть ограничена. Может возникнуть перекрестная реактивность с близкородственными антигенами или антителами, что приведет к ложноположительным или ложноотрицательным результатам. Важно учитывать возможность перекрестной реактивности и при необходимости использовать подтверждающие тесты.
Интерпретация в зависимости от навыков: интерпретация результатов теста латексной агглютинации зависит от визуального наблюдения за образцами агглютинации. Эта интерпретация может быть субъективной и может варьироваться в зависимости от опыта и навыков человека, выполняющего тест. Стандартизированные руководства и обучение необходимы для минимизации различий между наблюдателями и обеспечения последовательной и точной интерпретации.
FAQ
Что такое реакция латекс-агглютинации?
Реакция латексной агглютинации — это диагностический метод, в котором используются частицы латекса, покрытые антигенами или антителами, для выявления присутствия специфических антигенов или антител в образце пациента.
Как работает латексная агглютинация?
В реакции латексной агглютинации, если целевой антиген или антитело присутствует в образце пациента, он будет связываться с соответствующими антителами или антигенами, нанесенными на частицы латекса. Это связывание приводит к слипанию или агглютинации частиц латекса, что можно наблюдать визуально.
Каковы преимущества реакции латекс-агглютинации?
Реакция латекс-агглютинации имеет ряд преимуществ, включая простоту, быстроту, экономичность и относительно высокую чувствительность. Большой размер латексных шариков облегчает визуализацию реакции агглютинации.
Каковы ограничения тестов латексной агглютинации?
Некоторые ограничения тестов латексной агглютинации включают необходимость тщательной стандартизации условий, поскольку pH, осмолярность и концентрация ионов могут влиять на результаты теста. Ложноположительные реакции могут возникать из-за определенных веществ, присутствующих в жидкостях организма, таких как ревматоидный фактор. Кроме того, некоторые методы агглютинации требуют утомительных этапов предварительной обработки, таких как нагревание или использование определенных агентов.
Что можно обнаружить в реакции латекс-агглютинации?
Реакции латексной агглютинации можно использовать для обнаружения широкого спектра аналитов, включая микробные и вирусные инфекции, аутоиммунные заболевания, гормоны, лекарства и белки сыворотки.
Как проводятся реакции латекс-агглютинации?
Процедура реакции латексной агглютинации включает смешивание образца пациента с частицами латекса, покрытыми специфическими антигенами или антителами. В смеси наблюдают на наличие агглютинации или комкования, что свидетельствует о положительном результате.
Как интерпретировать результаты реакции латекс-агглютинации?
На положительный результат реакции латексной агглютинации указывает наличие агглютинации или глыбок в любом из разведений, что подтверждает наличие целевого антигена или антитела. Отрицательный результат показывает отсутствие агглютинации, что указывает на отсутствие целевого антигена или антитела.
Можно ли использовать тесты латекс-агглютинации в условиях оказания медицинской помощи?
Да, тесты латекс-агглютинации могут быть адаптированы для условий оказания медицинской помощи благодаря их простоте и быстроте. Они могут дать быстрые результаты, что делает их ценными инструментами для немедленной диагностики или скрининга.
Являются ли реакции латекс-агглютинации специфичными?
Реакция латексной агглютинации может быть высокоспецифичной, если для покрытия латексных частиц используются соответствующие антигены или антитела. Однако в некоторых случаях может возникать перекрестная реактивность, приводящая к ложноположительным результатам. Тщательный выбор и проверка реагентов важны для обеспечения специфичности.
Каковы некоторые общие области применения тестов латексной агглютинации?
Реакция латексной агглютинации широко применяется в клинических лабораториях. Они обычно используются для обнаружения специфических антигенов, таких как Cryptococcus neoformans, Pneumococcus, Haemophilus influenzae и Meningococcus. Они также используются для диагностики бактериальных инфекций, обнаружения токсинов и измерения уровня С-реактивного белка.
Методика реакции латексной агглютинации
Общим для обоих типов латексных тестов является инкапсуляция латексных микробусинок с патоген-специфическими антигенами или антителами. Спинномозговую жидкость, сыворотку или мочу больного смешивают с покрытыми латексом частицами в серийных разведениях физиологического раствора и наблюдают агглютинацию (слипание).
А. Латексное покрытие
Покрытие латексных шариков для обнаружения антител включает несколько этапов. В процесс нанесения покрытия входят следующие этапы:
- Возьмите 20 мкл латексных шариков в 1.5 мл флаконе. Эти латексные шарики действуют как частицы-носители для антител.
- Добавьте 40 мкл глицин-солевого буфера во флакон, содержащий латексные шарики. Глицин-солевой буфер используется для промывки и разбавления латексных шариков, создавая оптимальные условия для процесса покрытия.
- Добавьте 60 мкл специфического антигена во флакон с латексными шариками. Антиген представляет собой молекулу-мишень, для которой будут обнаружены антитела. Обеспечьте тщательное перемешивание антигена с латексными шариками.
- Инкубируйте флакон при температуре 37°C в течение 2 часов. Эта инкубация позволяет антигену связываться с поверхностью латексных шариков, что приводит к покрытию шариков антигеном.
- После инкубации флакон центрифугируют при скорости 5000 об/мин в течение 10 минут. Эта стадия центрифугирования помогает отделить комплексы латексных шариков и антигена от супернатанта.
- Тщательно аспирируйте и удалите супернатант, следя за тем, чтобы не нарушить осадок, содержащий латексные шарики с покрытием. Осадок содержит латексные шарики, покрытые желаемым антигеном.
- Ресуспендируйте осадок в 1 мл блокирующего буфера. Блокирующий буфер используется для предотвращения неспецифического связывания и уменьшения фонового шума на последующих этапах тестирования.
- Снова центрифугируйте флакон при 5000 об/мин в течение 10 минут. Этот шаг помогает смыть любой несвязанный антиген и дополнительно улучшить покрытие латексных шариков.
- Повторите этап промывки еще раз, чтобы обеспечить полное удаление любого оставшегося несвязавшегося антигена.
- Добавьте к осадку 90 мкл блокирующего буфера и хорошо перемешайте. Этот шаг гарантирует, что покрытые латексные шарики суспендированы в блокирующем буфере и готовы к дальнейшему использованию в тесте латексной агглютинации.
- Инкубируйте флакон при температуре 4°C в течение ночи. Такой длительный инкубационный период обеспечивает оптимальное связывание антигена с латексными шариками и обеспечивает стабильность покрытых частиц для последующего тестирования.
Б. Реакция агглютинации
Реакция агглютинации включает несколько этапов наблюдения и интерпретации результатов. Вот шаги для выполнения теста агглютинации:
Взять 200 мкл глицин-солевого буфера во флакон. Этот буфер обеспечивает оптимальную среду для протекания реакции агглютинации.
Добавьте 4 мкл исследуемой антисыворотки, разведенной в 50 раз, во флакон с буфером. Тест-антисыворотка содержит антитела, специфичные к тестируемому антигену-мишени.
В отдельном флаконе на 1.5 мл соедините 50 мкл искомого антигена с 50 мкл разведенной тест-антисыворотки. Тщательно перемешайте содержимое, чтобы обеспечить правильное взаимодействие между антигеном и антителами. Инкубируйте эту смесь при комнатной температуре в течение 10 минут, чтобы произошла реакция антиген-антитело.
Пипеткой 10 мкл латекса с ранее нанесенным покрытием на предметное стекло. Латексные шарики уже должны быть покрыты специфическим представляющим интерес антигеном, как описано на предыдущих этапах покрытия.
Добавьте 10 мкл разбавленной тестовой антисыворотки (из шага 2) в одну обозначенную область на предметном стекле, помеченную как предметное стекло А. Эта тестовая антисыворотка содержит антитела, которые будут реагировать с антигеном, покрытым на латексных шариках.
Добавьте 10 мкл смеси антисыворотки и антигена (из шага 3) в другую обозначенную область на предметном стекле, помеченную как предметное стекло B. Эта смесь содержит как антитела, так и антигены, что позволяет обнаружить реакцию антиген-антитело.
Добавьте 10 мкл глицин-солевого буфера в третью обозначенную область на предметном стекле, помеченную как предметное стекло C. Это служит отрицательным контролем, так как в этой области нет специфического антигена или антитела.
Возьмите зубочистку и тщательно перемешайте содержимое каждого предметного стекла
Важно использовать новую зубочистку для каждого слайда, чтобы избежать перекрестного загрязнения.
После смешивания дайте предметным стеклам постоять в течение 2 минут. В это время наблюдайте за реакцией на каждом слайде.
Похожие патенты RU2270449C1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ | 2002 |
|
RU2212668C1 |
| СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ВИРУСНЫМ РЕСПИРАТОРНЫМ ИНФЕКЦИЯМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2008 |
|
RU2421731C2 |
| Вакцина ассоциированная против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная | 2018 |
|
RU2696007C1 |
| ВАКЦИНА ИНАКТИВИРОВАННАЯ КОМБИНИРОВАННАЯ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ПАРАГРИППА-3, ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ, РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ, РОТА- И КОРОНАВИРУСНОЙ БОЛЕЗНЕЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2009 |
|
RU2395298C1 |
| ВАКЦИНА ИНАКТИВИРОВАННАЯ КОМБИНИРОВАННАЯ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ПАРАГРИППА-3, РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ, ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ И ПАСТЕРЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2009 |
|
RU2403061C1 |
| КОМПЛЕКСНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА) ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСНЫМ РЕСПИРАТОРНЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2008 |
|
RU2371726C1 |
| ШТАММ ТК-А/К ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИННЫХ И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ | 2004 |
|
RU2279474C1 |
| СЫВОРОТКА ПРОТИВ БОЛЕЗНЕЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ВЫЗЫВАЕМЫХ ВИРУСАМИ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ПАРАГРИППА, РОТА, КОРОНА И ДИАРЕИ — БОЛЕЗНИ СЛИЗИСТЫХ, ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКАЯ ГИПЕРИММУННАЯ, СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНЕЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ВЫЗЫВАЕМЫХ ВИРУСАМИ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ПАРАГРИППА, РОТА, КОРОНА И ДИАРЕИ — БОЛЕЗНИ СЛИЗИСТЫХ | 2010 |
|
RU2438709C1 |
| ВАКЦИНА АССОЦИИРОВАННАЯ ПРОТИВ АДЕНОВИРУСНОЙ, ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ, ПАРАГРИППА-3 И ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ-БОЛЕЗНИ СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧЕК КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ИНАКТИВИРОВАННАЯ ЭМУЛЬСИОННАЯ | 2012 |
|
RU2517733C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ К АДЕНОВИРУСУ BOVINE-10 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2020 |
|
RU2772751C1 |
